2 × טאַק פּלוס פּקר מיקס
טעטיקייט דעפֿיניציע
1 יוניט (ו) טאַק פּלוס דנאַ פּאָלימעראַסע טעטיקייט איז דיפיינד ווי די סומע פון ענזיים פארלאנגט צו ינקאָרפּערייט 10 nmol דעאָקסינוקלעאָטידעס אין זויער-ינסאַליאַבאַל סאַבסטאַנסיז ביי 74 ° C אין 30 מינוט מיט אַקטיווייטיד לאַקס זיירע דנאַ ווי אַ מוסטער/אָנפאַנגער.
קוואַליטעט קאָנטראָל
די ריינקייַט דורך SDS-PAGE דיטעקשאַן איז מער ווי 99%; קיין טעטיקייט פון עקסאָגענאָוס נוקלעאַסע איז דיטעקטאַד; איין-קאָפּיע דזשין אין מענטש גענאָמע קען זיין אַמפּלאַפייד יפעקטיוולי; קיין באַטייַטיק טעטיקייט ענדערונג ווען סטאָרד אין צימער טעמפּעראַטור פֿאַר איין וואָך.
הויפּט טעכניש פּאַראַמעטערס
טאַק פּלוס דנאַ פּאָלימעראַסע האט 5'-3 'עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט און 3'-5' עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט. פּקר פּראָדוקטן קענען זיין גלייך קלאָונד אין TA וועקטאָר. אויב די קלאָונינג עפעקטיווקייַט דאַרף זיין ימפּרוווד, עס איז רעקאַמענדיד צו רייניקן די PCR פּראָדוקטן ערשטער און דורכפירן א-טיילינג איידער קלאָונינג אין TA וועקטאָר.
איין-רער טאַק פּלוס פּקר מיקס (נאַשאַנאַל הויך-טעק פּראָדוקט סערטאַפאַקיישאַן)
■ די טאַק פּלוס פּקר מיקס ימפּרוווז ספּעסיפיסיטי און סענסיטיוויטי פון פּקר אָפּרוף און קענען אַמפּלאַפיי קאָמפּלעקס טעמפּלאַטעס מיט הויך גק אינהאַלט, צווייטיק סטרוקטור און די. איר קענען פאַרגיכערן אַרויף צו 2 עקזעמפלארן פון דער ציל מוסטער, וואָס ינשורז מער פּינטלעך יקספּערמענאַל רעזולטאַטן.
■ די יינציק טאַקל פּלוס פּקר מיקס פאָרמולע מאכט די גאנצע אָפּרוף סיסטעם זייער סטאַביל, און די טעטיקייט וועט נישט זיין אַפעקטאַד דורך ריפּיטיד פרירן-טאָ אָדער לאַנג-טערמין סטאָרידזש ביי 4 ° C.
■ די סטאַביל און עפעקטיוו פאַר-צוגעגרייט פּקר מישן לייזונג קענען מאַכן די אָפּעראַציע שנעל און פּשוט, זייער רידוסינג אַרבעט ינטענסיטי און מוסטערונג טעות. הויך-פאָרשטעלונג פּקר ענכאַנסער און אָפּטימיזער זענען אויך ינקלודעד אין דעם מישן, וואָס ראַדוסאַז די רעקווירעמענץ פֿאַר פּקר טנאָים.
■ דער פּראָדוקט האט סיסטעמען וואָס אַנטהאַלטן פאַרב און פאַרב. פאַרב מיט PCR מיקס פּראָדוקטן קענען זיין ילעקטראָופאָרעזעד גלייך נאָך פּקר אָן אַדינג מוסטער באַפער.
אַפּפּליקאַטיאָנס
עס איז קאַמאַנלי געניצט פֿאַר אַמפּלאַפאַקיישאַן פון טעמפּלאַטעס מיט הויך פאַדעלאַטי און קאָמפּלעקס סטרוקטור, אַזאַ ווי הויך גק אינהאַלט און צווייטיק סטרוקטור. אין רובֿ פאלן, עס קענען פאַרבייַטן Taq DNA polymerase.
כל די פּראָדוקטן קענען זיין קאַסטאַמייזד פֿאַר אָדם/אָעם. פֿאַר פרטים,ביטע גיט קאַסטאַמייזד סערוויס (אָדם/אָעם)
  |
ניצן גענאָמיק דנאַ ווי אַ מוסטער צו אַמפּלאַפיי 1 קב פראַגמענט. נאָך די PCR אָפּרוף, נעמען 5 μl פֿאַר דיטעקשאַן פון עלעקטראָפאָרעס. |
א -1 מוסטער
■ דער מוסטער כּולל פּראָטעין ימפּיוראַטיז אָדער טאַק ינכיבאַטערז עטק .—— רייניקן דנאַ מוסטער, באַזייַטיקן פּראָטעין ימפּיוראַטיז אָדער עקסטראַקט מוסטער דנאַ מיט רייניקונג קיץ.
■ די דענאַטוראַטיאָן פון די מוסטער איז נישט גאַנץ —— אַפּראָופּרייטלי פאַרגרעסערן דענאַטוראַטיאָן טעמפּעראַטור און פאַרלענגערן דענאַטוראַטיאָן צייט.
■ דערנידעריקונג פון מוסטער —— גרייטן דעם מוסטער צוריק.
א -2 אָנפאַנגער
■ נעבעך קוואַליטעט פון אָנפאַנגער —— סינטאַסייז ווידער די אָנפאַנגער.
■ דערנידעריקונג פון אָנפאַנגער —— עלימינירן די הויך קאַנסאַנטריישאַן פּרימערס אין אַ קליין באַנד פֿאַר פּרעזערוויישאַן. ויסמיידן קייפל ייַז קאַלט און טאָינג אָדער לאַנג-טערמין 4 ° C קריאָפּרעסערוועד.
■ ינאַפּראָופּרייט פּלאַן פון אָנפאַנגער (למשל אָנפאַנגער לענג איז נישט גענוג, דימער געשאפן צווישן אָנפאַנגער, עטק.) -רידיזיין אָנפאַנגער (ויסמיידן פאָרמירונג פון אָנפאַנגער דימער און צווייטיק סטרוקטור)
א -3 מג2+קאָנצענטראַציע
■ מג2+ קאַנסאַנטריישאַן איז צו נידעריק —— רעכט פאַרגרעסערן Mg2+ קאַנסאַנטריישאַן: אָפּטימיזע די מג2+ קאַנסאַנטריישאַן דורך אַ סעריע פון ריאַקשאַנז פון 1 ממ צו 3 ממ מיט אַ מעהאַלעך פון 0.5 ממ צו באַשטימען די אָפּטימאַל מג2+ קאַנסאַנטריישאַן פֿאַר יעדער מוסטער און אָנפאַנגער.
א -4 אַנילינג טעמפּעראַטור
■ די הויך אַנילינג טעמפּעראַטור אַפעקץ די ביינדינג פון אָנפאַנגער און מוסטער. - רעדוצירן די אַנילינג טעמפּעראַטור און אַפּטאַמייז די צושטאַנד מיט אַ גראַדיענט פון 2 ° C.
א -5 עקסטענסיאָן צייט
■ קורץ פאַרלענגערונג צייט —— פאַרגרעסערן די פאַרלענגערונג צייט.
פענאָמענאַ: נעגאַטיוו סאַמפּאַלז אויך ווייַזן די ציל סיקוואַנס באַנדס.
א -1 קאַנטאַמאַניישאַן פון פּקר
■ קרייז קאַנטאַמאַניישאַן פון ציל סיקוואַנס אָדער אַמפּלאַפאַקיישאַן פּראָדוקטן —— קערפאַלי נישט צו שטעלן די מוסטער מיט די ציל סיקוואַנס אין די נעגאַטיוו מוסטער אָדער פאַרגיסן זיי פֿון די סענטריפוגע רער. די רייידזשאַנץ אָדער ויסריכט זאָל זיין אַוטאָקלאַוועד צו עלימינירן יגזיסטינג נוקלעיק אַסאַדז, און די עקזיסטענץ פון קאַנטאַמאַניישאַן זאָל זיין באשלאסן דורך נעגאַטיוו קאָנטראָל יקספּעראַמאַנץ.
■ רייידזשאַנט קאַנטאַמאַניישאַן —— אַליקאָט די רייידזשאַנץ און סטאָרז ביי נידעריק טעמפּעראַטור.
א -2 פּרייםr
■ מג2+ קאַנסאַנטריישאַן איז צו נידעריק —— רעכט פאַרגרעסערן Mg2+ קאַנסאַנטריישאַן: אָפּטימיזע די מג2+ קאַנסאַנטריישאַן דורך אַ סעריע פון ריאַקשאַנז פון 1 ממ צו 3 ממ מיט אַ מעהאַלעך פון 0.5 ממ צו באַשטימען די אָפּטימאַל מג2+ קאַנסאַנטריישאַן פֿאַר יעדער מוסטער און אָנפאַנגער.
■ ימפּראַפּער אָנפאַנגער פּלאַן, און דער ציל סיקוואַנס האט האָמאָלאָגי מיט די ניט-ציל סיקוואַנס. —— ווידער-פּלאַן פּרימערס.
פענאָמענאַ: די פּקר אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנדס זענען סתירה מיט די דערוואַרט גרייס, אָדער גרויס אָדער קליין, אָדער טייל מאָל אַ ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנדס און ניט-ספּעציפיש אַמפּלאַפאַקיישאַן באַנדס פּאַסירן.
א -1 אָנפאַנגער
■ נעבעך אָנפאַנגער ספּעסיפיסיטי
—— ווידער-פּלאַן אָנפאַנגער.
■ די אָנפאַנגער קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך —— רעכט פאַרגרעסערן די דענאַטוראַטיאָן טעמפּעראַטור און פאַרלענגערן די דענאַטוראַטיאָן צייט.
א -2 מג2+ קאָנצענטראַציע
■ די מג2+ קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך —— ריכטיק רעדוצירן די Mg2+ קאַנסאַנטריישאַן: אָפּטימיזע די מג2+ קאַנסאַנטריישאַן דורך אַ סעריע פון ריאַקשאַנז פון 1 ממ צו 3 ממ מיט אַ מעהאַלעך פון 0.5 ממ צו באַשטימען די אָפּטימאַל מג2+ קאַנסאַנטריישאַן פֿאַר יעדער מוסטער און אָנפאַנגער.
א -3 טערמאָסטאַבלע פּאָלימעראַסע
■ יבעריק סומע פון ענזיים —— רעדוצירן די סומע פון ענזיים צונעמען אין ינטערוואַלז פון 0.5 יו.
א -4 אַנילינג טעמפּעראַטור
■ די אַנילינג טעמפּעראַטור איז צו נידעריק —— אַפּראָופּרייטלי פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור אָדער אַדאַפּט די צוויי-בינע אַנילינג אופֿן
A-5 פּקר סייקאַלז
■ צו פילע פּקר סייקאַלז —— רעדוצירן די נומער פון פּקר סייקאַלז.
א -1 אָנפאַנגער—— נעבעך ספּעסיפיסיטי —— רע-פּלאַן די אָנפאַנגער, טוישן די שטעלע און לענג פון די אָנפאַנגער צו פאַרבעסערן זייַן ספּעסיפיסיטי; אָדער דורכפירן נעסטעד פּקר.
א -2 מוסטער דנאַ
—— די מוסטער איז נישט ריין —— רייניקן די מוסטער אָדער עקסטראַקט דנאַ מיט רייניקונג קיץ.
א -3 מג2+ קאָנצענטראַציע
—— מג2+ קאַנסאַנטריישאַן איז צו הויך —— רעכט רעדוצירן מג2+ קאַנסאַנטריישאַן: אָפּטימיזע די מג2+ קאַנסאַנטריישאַן דורך אַ סעריע פון ריאַקשאַנז פון 1 ממ צו 3 ממ מיט אַ מעהאַלעך פון 0.5 ממ צו באַשטימען די אָפּטימאַל מג2+ קאַנסאַנטריישאַן פֿאַר יעדער מוסטער און אָנפאַנגער.
א -4 דנטפּ
—— די קאַנסאַנטריישאַן פון דנטפּס זענען צו הויך —— רעדוצירן די קאַנסאַנטריישאַן פון דנטפּ אַפּראָופּרייטלי
א -5 אַנילינג טעמפּעראַטור
—— צו נידעריק אַנילינג טעמפּעראַטור —— אַפּראָופּרייטלי פאַרגרעסערן די אַנילינג טעמפּעראַטור
א -6 סייקאַלז
—— צו פילע סייקאַלז —— אָפּטימיזע די ציקל נומער
דער ערשטער שריט איז צו קלייַבן די צונעמען פּאָלימעראַסע. רעגולער טאַק פּאָלימעראַסע קענען ניט פּרופריד ווייַל פון פעלן פון 3'-5 'עקסאָנוקלעאַסע טעטיקייט, און מיסמאַטש וועט שטארק רעדוצירן די פאַרלענגערונג עפעקטיווקייַט פון פראַגמאַנץ. דעריבער, רעגולער טאַק פּאָלימעראַסע קענען נישט יפעקטיוולי אַמפּלאַפיי ציל פראַגמאַנץ גרעסער ווי 5 קב. טאַק פּאָלימעראַסע מיט ספּעציעל מאַדאַפאַקיישאַן אָדער אנדערע הויך -פאַדעלאַטי פּאָלימעראַס זאָל זיין אויסגעקליבן צו פֿאַרבעסערן די פאַרלענגערונג עפעקטיווקייַט און טרעפן די באדערפענישן פון אַ לאַנג פראַגמענט אַמפּלאַפאַקיישאַן. אין אַדישאַן, די אַמפּלאַפאַקיישאַן פון לאַנג פראַגמאַנץ אויך ריקווייערז קאָראַספּאַנדינג אַדזשאַסטמאַנט פון אָנפאַנגער פּלאַן, דענאַטוראַטיאָן צייט, פאַרלענגערונג צייט, באַפער pH, עטק. כּדי צו פאַרמיידן מוסטער שעדיקן, די דענאַטוראַטיאָן צייט ביי 94 ° C זאָל זיין רידוסט צו 30 סעק אָדער ווייניקער פּער ציקל, און די צייט צו העכערונג טעמפּעראַטור צו 94 ° C איידער אַמפּלאַפאַקיישאַן זאָל זיין ווייניקער ווי 1 מין. דערצו, באַשטעטיקן די פאַרלענגערונג טעמפּעראַטור צו וועגן 68 ° C און דיזיינינג די פאַרלענגערונג צייט לויט די קורס פון 1 קב/מין קענען ענשור עפעקטיוו אַמפּלאַפאַקיישאַן פון לאַנג פראַגמאַנץ.
די טעות קורס פון PCR אַמפּלאַפאַקיישאַן קענען זיין רידוסט דורך די נוצן פון פאַרשידן דנאַ פּאָלימעראַסעס מיט הויך פאַדעלאַטי. צווישן אַלע די טאַק דנאַ פּאָלימעראַסעס געפֿונען ביז איצט, Pfu ענזיים האט די לאָואַסט טעות קורס און די העכסטן פאַדעלאַטי (זען אַטאַטשט טיש). אין אַדישאַן צו ענזיים סעלעקציע, ריסערטשערז קענען רעדוצירן די PCR מיוטיישאַן קורס דורך אָפּטימיזינג אָפּרוף טנאָים, אַרייַנגערעכנט אָפּטימיזינג באַפער זאַץ, קאַנסאַנטריישאַן פון טערמאָסטאַבלע פּאָלימעראַס און אָפּטימיזינג פּקר ציקל נומער.
פּראָדוקטן קאַטעגאָריעס
וואָס קלייַבן יו
זינט זייַן פאַרלייגן, אונדזער פאַבריק איז דעוועלאָפּינג ערשטער וועלט קלאַס פּראָדוקטן מיט אַדכירינג דעם פּרינציפּ
פון קוואַליטעט ערשטער. אונדזער פּראָדוקטן האָבן גאַינעד ויסגעצייכנט שעם אין די ינדאַסטרי און וואַליאַבלע צוטרוי צווישן נייַע און אַלט קאַסטאַמערז.
- תּל: +86 010-59822688
- בילדינג 5, נומ 86, שואַנגיינג וועסט וועג, טשאַנגפּינג דיסטריקט, בעידזשינג.
- people@tiangen.com
